В ткани раковой опухоли гортани активность фермента повышалась, что особенно выражено для растворимой фракции. Активность фермента пропорциональна количеству креатина, образующегося в результате ферментативной реакции. Активность гексокиназы в синцитиотрофобласте плаценты и эритроцитах периферической крови беременных третьего триместра с активной цитомегаловирусной инфекцией.

После 30-минутной инкубации при 0° С мембраны, содержащие адсорбированную гексокиназу, отделяют центрифугированием при 100 ООО я в течение 1 ч и суспендируюг в среде инкубации.

Поскольку кроме II изозима гексокиназа скелетных мышц содержит в больших количествах I изозим фермента (до 40%), проводят идентификацию изозимного состава полученного препарата гексокиназы.

К счастью, весьма чувствительные и специфичные методы оказалось возможным создать на основе определения каталитической активности ферментов. Поскольку при этом трудно определить число молекул фермента в пробе или их общую массу, результаты выражают в условных единицах активности фермента. Далее сравнивают относительные количества фермента в различных экстрактах. В предыдущем примере оценка ферментативной активности основывалась на измерении скорости образования продукта (NADH).

Глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа, глюкоза, АТР, Mg2+ и NADP+ добавлены в избытке. В этих условиях скорость общей сопряженной реакции зависит от количества добавленной гексокиназы. Активность некоторых киназ в биологических жидкостях человека имеет диагностическое значение при ряде патологических состояний.

Аннотация научной статьипо медицине и здравоохранению, автор научной работы — Луценко Михаил Тимофеевич

В мышцах и цереброспинальной жидкости активность аденилаткиназы значительно снижается при мышечной дистрофии Дюшенна. В норме активность креатинкиназы в сыворотке крови, установленная с помощью этого метода, составляет от 0 до 220 нмоль/(с×л), или от 0 до 13 ME .

У больных злокачественными новообразованиями ЛОР-органов активность сывороточной гексокиназы определяется в 84-87% случаев. Американские медики изучили распределение активности ЛДГ в различных клеточных структурах опухоли и окружающих ее тканей (операционный материал). В макроскопически неизмененной слизистой оболочке гортани, служащей относительным контролем, самая высокая активность наблюдалась в растворимой фракции.

Сопряженный ферментный анализ

Показатели активности ЛДГ в этой фракции в 3,5 раза выше соответствующих данных для относительного контроля. Активность митохондриальной ЛДГ в пограничной с опухолью ткани и самой опухоли одинакова. Изучали также активность фермента в биоптическом материале злокачественных опухолей различных стадий, доброкачественных опухолей, твердых папиллом и при хроническом ларингите. Увеличение активности выражено в одинаковой мере (в среднем в 2,6 раза) при начальных (II), более поздних (III) и запущенных (III-IV) стадиях опухолевого процесса.

Определение активности ЛДГ можно использовать не только для установления малигнизации, но и для дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных опухолей гортани. Повышенная активность ЛДГ гистохимическими методами исследования выявлена также и в злокачественных опухолях полости носа по сравнению с непораженной слизистой оболочкой.

При злокачественных новообразованиях ЛОРорганов в сыворотке крови и ее форменных элементах исследовали также активность ряда других ферментов гликолиза

Согласно полученным результатам, активность сывороточного фермента при раке гортани значительных изменений не претерпевает. Врачи обнаружили, что повышенная активность этого фермента в большем проценте случаев наблюдается при запущенных стадиях рака гортани, особенно при наличии стеноза.

По данным исследований, активность этого фермента обмена углеводов в сыворотке крови при раке гортани повышалась в 1,3-1,6 раза. Наибольшее увеличение характерно для III стадии заболевания. В связи с этим изменения конформации фермента под тем или иным влиянием приведут к изменению активности фермента. Особый интерес представляет гормональный контроль конформации и активности ферментов.

Регулирующее влияние гормонов на активность ферментов может осуществляться различными путями. Поскольку щелочная фосфатаза является ферментом, содержащим Zn2+, определяли содержание цинка в ферменте до и после воздействия гормонов. В связи с этим одним из механизмов гомеостаза может быть изменение количества коферментов и прочности их связывания с апоферментами.

Возможность кофакторной стабилизации ферментов возрастает при увеличении содержания коферментов в организме. Об этом, в частности, свидетельствует тот факт, что субстратами протеинкиназ являются белки хроматина и рибосом. В последние годы появились работы, проливающие свет на роль цАМФ в регуляции активности и индукции ферментов.

Она была в 3 раза выше активности ЛДГ в митохондриальной и надмитохондриальной фракциях

От проницаемости мембран в значительной мере зависит активность ферментов и как следствие этого — протекание реакций обмена и адаптация живых систем к различным воздействиям. В табл. 7 приведены данные о наличии этого фермента в тканях животных и наличии ответа его на гормоны. Увеличение активности аденилциклазы в ответ на введение гормонов проявляется очень быстро. Этот фермент локализован в мембранах клеток, на которые действует альдостерон.

Адсорбция гексокиназы на фосфолипидных мембранах (липосомах). Препарат иммобилизованной гексокиназы используют для изучения свойств в день получения. Изучают влияние 15 мМ Mg b и 5 мМ глюкозы на способности гексокиназы связываться с липосомами. Чтобы оценить количество фермента в пробе тканевого экстракта или биологической жидкости, измеряют скорость реакции, катализируемой содержащимся в этой пробе ферментом.

Рис. 7.5. Принцип измерения активности NADH- или -зависимой дегидрогеназы. Рис. 7.6. Калибровочная кривая для определения количества фермента. При участии киназ происходит фосфорилирование низкомолекулярных (глюкозы, витаминов, креатина и др.) и высокомолекулярных (белков, в т.ч. ферментных белков) соединений.

С этой целью сопоставляют активность гексокиназы, связанной с липосомами в присутствии и в отсутствие указанных реагентов. При всех исследованных стадиях рака гортани активность ЛДГ значительно повышается по сравнению с активностью макроскопически неизмененной слизистой оболочки. Рис. 7.7. Определение активности гексокиназы в системе, в которой протекает сопряженная ферментативная реакция, катализируемая глюкозо-6-фосфатдегидрогеназой.