К фотометрическому методу определения пероксидазы и полифенолоксидазы

Результаты исследований заносят в табл. 33 и делают выводы. Окисление субстратов в процессе дыхания происходит с участием окислительных ферментов. Активность синтеза АТФ в митохондриях и степень сопряженности этого процесса с работой ЭТЦ является характеристикой энергетической эффективности дыхания.

Тормозящее действие различных веществ листа на активность ферментов ликвидируют многократной обработкой охлажденным ацетоном до удаления пигментов, фенольных и других растворимых в ацетоне веществ.

Химия и химическая технология

Полученный осадок служит в качестве ферментативного препарата (свободного и связанного) и сохраняет свою активность в течение недели при хранении в холодильнике. Иногда, в зависимости от сорта, нижний спой окрашивается в красный цвет, но он не переходит в эфир и не мешает дальнейшему ходу определения. Перед фотометрированием колбочки ставят в холодильник, достают по мере измерения и быстро фотометрируют в закрытых кюветах.

За единицу глюкоамилазной активности принято такое коли-. ство ферментов, которое, действуя на растворимый крахмал при С и заданном значении pH 4,7 в течение 1 мин, освобождает мкмоль глюкозы. Глюкоза определяется глюкозооксидазным ме-)дом с применением глюкозооксидазы и пероксидазы.

Она нашла, что энзиматическая активностьпероксидазы достигала максимума в яровизированных растениях, указывая на их ускоренное развитие. Через реакции дыхания в растении осуществляется связь различных процессов обмена веществ.

Основным продуктом окисления в растительном организме является глюкоза. Окисление последней происходит через ряд стадий — гликолиз (анаэробные реакции), цикл Кребса и работа ЭТЦ дыхания. Существуют и другие пути окисления субстратов в растении, например, окислительный пентозофосфатный цикл, в котором используется однократно фосфорилированная глюкоза. Отдельные реакции дыхания в настоящее время хорошо изучены.

Кроме того, в дыхании участвуют ферменты — промежуточные переносчики электронов в ЭТЦ митохондрий. Основной путь окисления водорода до воды, ведущий к наиболее эффективному накоплению энергии в АТФ, связан с участием цитохромной системы. Многоступенчатый перенос водорода и электрона способствует постепенному выделению энергии малыми порциями, что создает условия для эффективного ее использования в клетке.

Следует заметить, что набор промежуточных метаболитов, синтезируемых в процессе дыхания, значительно шире, чем набор метаболитов фотосинтеза. Общая интенсивность дыхательного процесса у растений может быть охарактеризована по скорости поглощения кислорода и выделения углекислого газа, скорости расходования органических веществ. Эти дегидрогеназы могут быть названы и оксидазами из-за их взаимодействия с кислородом.

Цель исследования: Определить дегидрогеназную активность в прорастающих семенах гороха по скорости восстановления метиленовой синей в зависимости от температуры. Половину материала поместить в колбу с водой и кипятить в течение 3 мин для разрушения ферментов.

Поставить 1 и 2-ю пробирки в термостат или в водяную баню при 30 0С. а 3 и 4-ю оставить в комнатных условиях. Отметить время обесцвечивания семядолей в пробирках, после чего вытряхнуть семена в чашки (без воды) и наблюдать восстановление окраски. Пероксидазы — ферменты, окисляющие субстрат при помощи пероксида водорода.

Приготавливают четыре пробирки и вносят в них по 5 мл 1%-ного раствора гидрохинона. Жизнедеятельность растительных организмов связана с вовлечением кислорода в метаболический и энергетический обмен клеток.

Что еще посмотреть: